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小量質粒DNA的提取之堿裂解法

此方法適用于小量質粒DNA的提取，提取的質粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：1、接1%含質粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養(yǎng)基2、37℃振蕩培養(yǎng)箱過夜3、取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液4、加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合5、加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1％SDS)，輕輕翻轉混勻，置于冰浴5min6、加入0.15ml預冷溶...

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真空干燥箱做三聚氰胺實驗

三聚氰胺（C3H6N6）是一種有機化合物，因其化學結構中含有三個氰基（-CN）而得名。在實驗中使用真空干燥箱進行三聚氰胺實驗，可能是為了在低壓環(huán)境下除去三聚氰胺樣品中的水分，以獲得干燥的樣品。以下是一個簡化的實驗步驟，但請注意，具體實驗操作應遵循實驗室安全規(guī)范和化學品操作指南。實驗步驟：準備：確保實驗室通風良好，穿戴適當?shù)膫€人防護裝備，如實驗服、手套、護目鏡等。稱量：準確稱取一定量（根據(jù)實驗需要確定）的三聚氰胺樣品。裝樣：將稱量好的三聚氰胺樣品放入干燥的試管或者稱量瓶中。預干...

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一文了解箱式電阻爐的使用注意事項

箱式電阻爐是一種常見的電爐形式，分為立式，臥式，分體式，一體式。使用溫度為1200度以下，1400度以下，1600度以下，1700度以下，分別以電阻絲、硅碳棒、硅鉬棒為發(fā)熱元件，根據(jù)需要可選擇，箱式電爐除通常在空氣中加熱外，還有可通氣氛和密封抽真空電爐，形式多樣。廣泛用于陶瓷、冶金、電子、玻璃、化工、機械、耐火材料、新材料開發(fā)、特種材料、建材等領域的生產(chǎn)及實驗。箱式電阻爐使用注意事項：1.使用時爐膛溫度不得超過額定爐溫，也不要長時間工作在額定溫度以上。2.工作環(huán)境條件為：溫度...

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如何快速估算每次實驗放幾只動物？

動物實驗設計應遵循實行“3R原則”，包括實驗動物的替代、減少和優(yōu)化原則，其中減少即指盡量減少實驗動物的數(shù)量。查閱文獻，并未發(fā)現(xiàn)對實驗動物數(shù)目有絕對要求，但在減少的同時，一定要滿足統(tǒng)計學要求。統(tǒng)計學上要求一般至少每組有6個可用數(shù)據(jù)，才有意義。一般小鼠的每組一般不少于10只；一般大鼠每組不少于6只；大動物等級越高，價格越貴，根據(jù)情況可適當減少，但一般不能少于4-5只。作為實驗設計者，我們不僅僅知其然，也要知其所以然1、為什么要進行樣本量估算？科學性要求：使研究設計更加嚴謹。倫理學...

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細胞傳代培養(yǎng)的流程和注意事項

細胞傳代培養(yǎng)的流程和注意事項如下：1、當細胞密度達到其生長密度高處時（一般腫瘤細胞為80-100%，原代細胞和干細胞為80-90%，有些細胞為40-50%，熟知所養(yǎng)細胞的生長密度極限），移除舊培養(yǎng)液；2、用PBS洗滌兩次（舊培養(yǎng)中的鈣離子會抑制胰酶的活性），加入1ml胰酶消化液（以T25培養(yǎng)瓶為例），立即蓋好蓋子，把培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下觀察，如大部分細胞變圓，立即移除胰酶消化液（如大部分細胞漂起，可不移除胰酶消化液），加入5ml預熱培養(yǎng)基，用吸管取培養(yǎng)液吹打瓶壁細胞，使其脫...

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TUNEL法檢測細胞凋亡原理和經(jīng)驗

TUNEL法檢測細胞凋亡原理和經(jīng)驗細胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。由此，TUNEL成為了檢測DNA片段化（細胞凋亡）的方法。...

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如何使用馬弗爐融化金屬粉末？

使用馬弗爐融化金屬粉末是在實驗室或工業(yè)生產(chǎn)中常見的一種操作，需要遵循安全規(guī)程和科學的操作步驟。以下是一個基本的操作流程：準備工作：在開始之前，確保馬弗爐已經(jīng)清潔，并預熱至所需的溫度。準備金屬粉末，確認其化學成分和純度，確保它適合在馬弗爐中融化。準備適當?shù)娜诨ぞ撸缒突鹕谆騝rucible（坩堝）。裝載金屬粉末：將金屬粉末裝入耐火材料制成的坩堝中，注意不要裝得太滿，以免在融化過程中溢出。放入馬弗爐：輕輕地將裝有金屬粉末的坩堝放入馬弗爐內。慢慢升降溫度的速度不可太快，以免金屬粉...

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免疫組化實驗常見問題分析

1.IHC實驗結果顯色過深一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育2.實驗結果存在非特異性顯色石蠟切片脫蠟——延長脫蠟時間蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間組織富含內源性生物素與過氧化物酶——使用相關試劑進行封閉3.實驗結果顯色弱或無染色一抗?jié)舛冗^低或孵育時間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時間組織中無目的抗原的表達一抗種屬來源與二抗不匹配注意事項切片脫蠟和水化要充分，加反應液時要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，同時防止干片...

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